灵芝菌种的孢子如何分离？

灵芝孢子分离法又称孢子弹射分离法，是利用某些灵芝子实体成熟后自行弹射孢子的特性，在无菌条件下，使弹射出的孢子落在合适的培养基上，在合适的条件下培养，孢子萌发成菌丝，获得纯菌株的方法。最近有网友问我们：如何分离灵芝菌株的孢子？灵芝菌株的孢子分离步骤有哪些？下面简单介绍一下我们的我要创富网，供网友参考。

1、分离材料的选择与消毒

灵芝孢子分离的材料来自多年人工培育的优良菌株和野生种。在相同的生长条件下，栽培同一种灵芝的不同菌株，其生产效益和质量有很大差异；然而，在不同环境条件下培养的同一品系，其优良性状的表现是不同的，即在相同环境条件下培养的同一品系，其单株之间会有差异。因此，应选择长期培育优良品种的优良单株作为分离材料。野生品系，没有经过人工培育，不知道其优良性状、抗逆性和生产性能。它们只能在收集原始材料进行育种时用于孢子分离。经过培养菌株间的对比试验，选出优良菌株进行孢子分离，经过培养菌株间的对比试验，选出优良菌株进行生产。在优胜劣汰的过程中，选择群体中的优秀个体作为孢子分离的材料。

分离用灵芝的理想子实体应具备该品种的主要典型特征，发育正常，个体健壮，无病虫害，成熟度适中。挑选后，及时采摘进行消毒。可将茎秆切去2/3，用清水洗去附着的污垢，用0.1%氯化汞溶液浸泡1~2分钟或70%酒精浸泡数秒至1分钟，取出，用无菌水反复冲洗，用消毒纱布或滤纸吸干表面水分备用。

2、灵芝孢子的采集

灭菌后可采用孢子弹射法收集孢子，即孢子从种子层自动弹射出来收集孢子。一般来说，所有的操作过程都应该在无菌条件下进行。

附着法。取一片灭菌的成熟子实体，用灭菌琼脂或糊状物，贴于含PDA培养基的试管斜面上或培养皿皿盖正上方，加棉塞或盖，室温培养。孢子自然脱落后，在无菌室用镊子除去小块子实体，或将带有孢子的培养基转移到新的试管斜面和平皿培养基上，塞紧或覆盖后继续培养。

孢子印迹收集法。表面消毒后，将成熟的子实体切下，放在已灭菌的白蜡或黑蜡光面纸上，盖上通风钟，24静置数小时，然后轻轻取出子实体，可见大量孢子落在纸上。将带有孢子印迹的纸保存在无菌条件下，以备后用。

空气孢子捕捉法。灵芝子实体成熟后，大量孢子喷出，形成烟雾状& ampquot孢子云和。quot子实体周围可见。将准备好的培养基板或试管口朝& ampquot孢子云和。quot使孢子附着在培养基表面，然后盖上培养皿或加棉塞。

3、灵芝孢子的分离

在制作原始种子之前，通常需要对收集的孢子进行分离和筛选。孢子分离根据接种在培养基上的孢子数量可分为单孢子分离和多孢子分离。灵芝孢子分离大多采用多孢子分离法。多孢子分离法简单，易操作，无不孕现象，在生产中常被采用。多孢子分离因孢子收集方式不同，可分为直接培养法、斜线法和涂布分离法。

直接培养法。通过孢子喷射分离、细菌折叠涂片和t

斜划线法。在无菌条件下，用接种针蘸取少量收集的孢子，在PDA斜面培养基上自下而上画线，不要太用力，以切割培养基表面强度。接种后，加入棉塞，并在合适的温度下培养。孢子萌发后，选择萌发早、生长旺盛的菌落，转移到新的试管斜面培养基上进一步培养。

涂层分离法。在无菌条件下，用接种环挑取少量收集的孢子，放入装有无菌水的试管中，充分摇匀制成孢子悬液，然后用无菌注射器或滴管吸取孢子悬液，在斜面或平面培养基表面注射1-2滴，用无菌接种环均匀包被，在适当温度下培养。孢子萌发后，选择发育良好、生长快的菌落，转移到新的试管斜面培养基上，恒温培养，得到母种。

为了观察菌丝或繁殖少量孢子，也采用单孢子分离：即从收集的孢子群中选取单个孢子进行培养，单独萌发成菌丝，获得纯菌株。按分离手段可分为稀释法、划线法、毛细管分离法和仪器分离法。